細胞老化最開始的現象通常為細胞內部會出現空泡(可能是凋亡小體),也可能會出現黑點,大多沿細胞周邊排布,內部中間也可能會顯現一些,但相對周邊為少。
老化以后的細胞會出現立體感慢慢消失,開始成扁平狀,細胞與細胞之間的間隔減小或混在一起,細胞不再是梭形,而會成為各種不規則形狀。
細胞折光性變差,鏡下可見細胞“變薄”,做轉染實驗時,細胞死亡率會較高。但培養液不會發生迅速變黃的現象,仍清亮。(但如果是細菌污染的話,一般會出現培養液的迅速變黃,混濁,鏡下可見大量繁殖的細菌;若是支原體污染的話,細胞也會失去正常形態,會有細胞的死亡)。
細胞的貼壁性減弱,開始有細胞漂浮于培養液中。
老化的細胞,表面分泌物會增多,細胞表面的純凈度越來越低。
分裂的細胞數量明顯的減少同時細胞的增殖速度也會大大下降。
防止細胞老化最主要還是要做到勤觀察、勤換液、勤傳代、勤保種,特別是傳代,不能等細胞太密了之后傳,一般細胞建議長到70%融合度傳代最好。
換培養液應該根據自己細胞消耗培養基的情況來確定是否該換。如果感覺時間不好把握的話就多培養幾瓶細胞,在不同的時間換液,最后再來比較下,看什么時候換液好,得出自己的結論。
選擇正確的血清與培養基:細胞對血清特別敏感,直接影響細胞的生長。一定要選擇適合的血清不然就會因營養物質不協調而導致細胞老化。
在間充質干細胞培養時必然要進行消化,但是消化對細胞的表面蛋白質有很強的破壞作用,因此不能長時間進行消化并且在選擇消化酶時也要選擇較為合適pH和濃度,不然就會使細胞老化或者分化。
在開始養細胞傳代時,也要特別注意凍存細胞,以保持細胞有種子存在,可以有效避免細胞損傷。