細胞株名稱:A549/DDP 人肺癌順鉑耐藥株 A549/DDP耐藥細胞
種屬:人
組織來源:肺癌
生長特性:貼壁生長
形態特征:上皮細胞
微生物及支原體檢測:陰性
安全性:所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。
培養條件:
*培養基:90%RPMI-1640+10%胎牛血清+2000ng/ml DDP
血清我們推薦用:
GIBCOFBS-10099-141 或 HYCLONEFBS-SH30084.03。
培養條件:37.0C carbon dioxide(CO2),5%
傳代方法:
收到細胞后,在倒置鏡下(最好是在 4X 物鏡)觀察整個細胞生長情況。
(一)如果細胞未長滿,用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,吸出培養液,換 10ml 新鮮培養液后繼續培養。
(二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養。具體步驟如下:
1. 棄去培養液,用 PBS(不含鈣,鎂離子)洗 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,倒放于37℃培養箱 1-3 分鐘預熱,之后翻轉培養瓶 10-30 秒,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量*培養基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加*培養基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養瓶中。如果沒有特別說明,收到細胞后的第一次傳代一般是一傳二。
注:1、觀察細胞最好在低倍鏡(4 或 5X 物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B請在 10X 或 20X 物鏡下。
2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基,細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。
3、有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。
4、收到細胞后,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們聯系。
A549/DDP耐藥細胞凍存方法:
凍存液:90%胎牛血清,10%DMSO
儲存:液氮儲存